凝膠成像系統(tǒng)的介紹

凝膠成像系統(tǒng)是用不同染色(如EB、考馬斯亮藍、銀染、sybr綠)和非化學(xué)發(fā)光成像(如微孔板和平板)對DNA/RNA/蛋白質(zhì)凝膠電泳進行檢測和分析。凝膠成像系統(tǒng)可用于常規(guī)生物工程研究，如分子量計算、密度掃描、密度定量和聚合酶鏈式反應(yīng)的分析定量工作。 樣品在電泳凝膠或其他載體上的遷移率不同，因此與標準品或其他替代標準品進行比較將對未知樣品進行定性分析。這是圖像分析系統(tǒng)的定性基礎(chǔ)。未知樣品可以根據(jù)其在地圖中的位置進行定性分析，根據(jù)未知樣本在凝膠中的遷移率并輔助marker來對未知樣本進行分子量大小標定，鑒別目的產(chǎn)物等確定成分和性質(zhì)的定性分析工作。 樣品部分吸收投射光或反射光，因此樣品條在通過攝影獲得的圖像上的光密度會不同。光密度與樣品的濃度或質(zhì)量成線性關(guān)系。根據(jù)未知樣品的光密度，通過與已知濃度的樣品條的光密度進行比較，可以得到未知樣品的濃度或質(zhì)量。這是圖像分析系統(tǒng)的定量基礎(chǔ)。采用新的紫外透射光源和透射光源技術(shù)，使光線分布更加均勻，大限度解決光密度不均勻的影響。 一般來說，凝膠成像系統(tǒng)可應(yīng)用于:凝膠成像系統(tǒng)可用于蛋白質(zhì)、核酸、多肽、氨基酸、聚氨基酸等生物分子的分離純化結(jié)果的定性分析。 分子量定量。對于常用的DNA膜，利用分子量量化功能在膠上標注DNA Marker條帶的已知分子量，自動生成擬合曲線，并以此測量未知條帶的分子量。用這種方法得到的結(jié)果比肉眼估計的結(jié)果要準確得多。 定量密度。測定DNA和RNA濃度常用的方法是紫外吸收法，但只能測定樣品中總核苷酸濃度，不能區(qū)分不同長度片段的濃度。利用凝膠成像系統(tǒng)和軟件，先標定DNA膠片上某個已知DNA含量的標準條帶的密度，然后方便點擊其他未知條帶，通過與已知條帶的密度對比，即可得到未知DNA含量。該方法也適用于測定PAGE蛋白膠帶的濃度。 密度掃描。在分子生物學(xué)和生物工程的研究中，常用的方法是計算蛋白質(zhì)表達產(chǎn)物在整個細菌蛋白質(zhì)中的百分比。傳統(tǒng)的方法是使用特殊的密度掃描，但這項工作可以通過使用生物分析軟件結(jié)合實驗室常規(guī)掃描儀直接照射的凝膠成像系統(tǒng)來完成。 聚合酶鏈式反應(yīng)定量。PCR定量主要是指如果PCR實驗擴增出多個目的條帶，可以通過軟件計算出每個條帶占總條帶的相對百分比。就這個功能而言，和密度掃描類似，但實際上原理不同。聚合酶鏈式反應(yīng)定量是量化選定條帶的相對密度，并計算它們在總和中的百分比。在密度掃描期間，為選定區(qū)域生成縱向掃描曲線并進行積分。